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產(chǎn)品型號：INS-10013776
產(chǎn)品代碼：
產(chǎn)品價格：
計量單位：盒
折 扣 率： 0
最后更新：2018-08-31
關 注 度：2717
生產(chǎn)企業(yè)：黃石市艾恩斯生物科技有限公司
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產(chǎn)品詳細介紹
僅供科研使用，不得用于臨床檢驗。
雌酮（E）定量檢測試劑盒（ELISA）
說明書
貨號：INS-10013776
使用前，請務必仔細閱讀說明書，如有不清楚的，請撥打24h技術支持專線：0714-6338558或18108699172，咨詢清楚再進行實驗。
【產(chǎn)品名稱】
通用名稱：雌酮（E）定量檢測試劑盒（ELISA）
英文名稱： Estrone ELISA KIT
【包裝規(guī)格】
48人份/盒，96人份/盒
【預期用途】
僅供科研使用，定量檢測血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清液中雌酮（E）的濃度。
【檢驗原理】
本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。在預包被抗雌酮（E）抗體（固相抗體）的微孔酶標板中，加入雌酮（E）校準品和待測樣本，再加入另一株HRP標記的抗雌酮（E）抗體（酶標抗體），經(jīng)過溫育與充分洗滌，去除未結合的組分，在微孔板固相表面形成固相抗體-抗原-酶標抗體的夾心復合物。加底物A和B，底物在HRP催化下，產(chǎn)生藍色產(chǎn)物，在終止液（2M 硫酸）作用下，最終轉(zhuǎn)化為黃色，在酶標儀上測定吸光度（OD值），吸光度（OD值）與待測樣品中雌酮（E）的濃度正相關。擬合校準品曲線，可以計算出樣本中雌酮（E）的濃度。
【主要組成成分】
主要成分
組分 數(shù)量 主要成分
校準品 0.5ml/管*6管 抗原配制的6個濃度標準品
包被微孔板 96T 預包被固相抗體
HRP標記抗體 6mL HRP標記的檢測抗體
樣本稀釋液 6mL 磷酸鹽緩沖液
底物液A 6mL 過氧化脲工作液
底物液B 6mL TMB工作液
終止液 6mL 2M 硫酸
20×濃縮洗滌液 30mL 含0.15%Tween20的PBS
說明書 1份 --
自封袋 1個 --
不干膠 2片 --
校準品濃度依次為：1000、500、250、125、62.5、31.25 pmol/L。校準品已經(jīng)通過測試，結果表明HBs抗原陰性，HIV1、HIV2和HCV抗體陰性，由于不存在一種試驗方法能夠完全保證沒有這些物質(zhì)，本品必須按照具有潛在的感染性進行處理，處理過程應當遵循通用的安全措施。
需要但未提供的材料及耗材
1、能夠檢測 450 nm 吸光度的酶標儀。
2、精密移液器及一次性吸頭
3、蒸餾水或去離子水
4、洗瓶或者自動洗板機
5、37℃水浴鍋或恒溫箱
6、1L量筒
7、無粉一次性乳膠手套
8、稀釋用聚丙烯試管
【儲存條件及有效期】
1、2-8℃保存，切勿冷凍，有效期6個月。
2、開封使用后，包被微孔板放入帶有干燥劑的自封袋中，密閉自封袋，并將全部試劑放回2-8℃冰箱。
3、開封后，按照建議的條件保存，校準品、包被微孔板和HRP標記抗體，有效期為28天，其他成分在標簽標明的有效期內(nèi)是穩(wěn)定的。
【適用儀器】
半自動的酶標儀，如Thermo MK3，或者國產(chǎn)酶標儀。
【樣本要求】
樣本類型和采集
以下只是列出樣品采集的一般指南。所有樣本采集過程中，不得使用疊氮鈉做為防腐劑。
1、細胞培養(yǎng)上清：4000rpm條件下離心20min，去除細胞顆粒和聚合物，上清液保存在- 20℃以下，避免反復凍融。
2、血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，4000rpm條件下離心20min，小心地分離出血清，保存在- 20℃以下，避免反復凍融。
3、血漿：肝素，EDTA，或檸檬酸鈉作為抗凝劑。在4000rpm條件下，離心20分鐘取上清，血漿保存在-20℃以下，避免反復凍融。
樣本保存和穩(wěn)定性
樣本在2-8℃條件下，可以儲存72h，或者在- 20℃儲存6個月。樣本收集后，不是一次檢測完，請按一次用量分裝凍存，避免反復凍融，使用時在室溫下解凍，確保樣品均勻充分解凍。
【試劑準備】
1、使用前，所有的組分都要至少復溫30min，確保充分復溫到室溫。
2、濃縮洗滌液：從冰箱取出的濃縮洗滌液，會有結晶產(chǎn)生，這屬于正�，F(xiàn)象，水浴加熱使結晶完全溶解。濃縮洗滌液與蒸餾水，按1:20稀釋，即1份的濃縮洗滌液，添加19份的蒸餾水。
3、底物：底物液A和B，在使用前，按1:1體積充分混合，混合后15分鐘內(nèi)使用。
操作程序
1、所有試劑和組分都先恢復到室溫，標準品、質(zhì)控品和樣品，建議做復孔。
2、按前面試劑準備中描述的方法，配制好試劑盒各種組分的工作液。
3、從鋁箔袋中取出所需板條，剩余的板條用自封袋密封放回冰箱。
4、設置標準品孔、樣本孔和空白孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL，樣本孔加待測樣本50μL，空白孔不加。
5、除空白孔外，標準品孔和樣本孔，加入辣根過氧化物酶標記的檢測抗體100μL。
6、用封板膜蓋住反應板，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
7、揭開封板膜，棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置20s，甩去洗滌液，吸水紙上拍干。
8、如此重復4次（共洗板5次）。若使用自動洗板機，請按洗板機操作程序進行洗板，添加浸泡20s的程序，可以提高檢測的精度。洗板結束，加底物前，要在干凈不掉屑的紙上，充分拍干反應板。
9、將底物A和B按1:1體積充分混合，所有孔中加入底物混合液100μL。用封板膜蓋住反應板，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育15min。
10、所有孔加入終止液50μL，在酶標儀上讀取各孔吸光度（OD值）。
【檢驗結果的解釋】
檢測完成后，以標準品濃度做為縱坐標，對應的吸光度（OD值）作為橫坐標，利用計算機軟件，采用四參數(shù)Logistic曲線擬合（4-pl），創(chuàng)建標準曲線方程，通過樣本的吸光度（OD值），利用方程計算樣品的濃度值。
如果樣品被稀釋，通過上述方法測的的濃度值，要乘以稀釋倍數(shù)，才是樣品的最終濃度。
【檢驗方法的局限性】
1、僅供科研使用，不得用于臨床診斷。
2、在試劑盒標示的有效期內(nèi)使用，過期產(chǎn)品不得使用。
3、跟其他廠家的試劑盒或者組分不能混用。
4、使用試劑盒配套的樣品稀釋液。
5、如果樣本值高于標準曲線最高濃度，請用檢測緩沖液稀釋樣本，并重新檢測。如果細胞培養(yǎng)上清樣本需要較大的稀釋倍數(shù)，請用細胞培養(yǎng)基進行適度稀釋。
6、待測樣本中存在的人抗鼠等異嗜抗體會干擾檢測結果，檢測前，請排除該因素。
7、通過其他方法得到的檢測結果，與本試劑盒測定結果不具有直接的可比性。
【產(chǎn)品性能指標】
1、物理性能
試劑盒的各液體組分應澄清透明、無沉淀或者絮狀物。微孔板鋁箔袋應真空包裝，無破損漏氣。
2、劑量反應曲線線性
校準品劑量反應曲線相關系數(shù)r值，大于等于0.9900。
3、精密度
批內(nèi)精密度：三組已知的高、中、低濃度樣品，進行二十次在同一個板塊內(nèi)精度評估。批內(nèi)變異系數(shù)CV%小于10%。
批間精密度：三組已知的高、中、低濃度樣品，進行二十次在不同板塊內(nèi)精度評估。批間變異系數(shù)CV%小于15%。
4、靈敏度
最低檢出劑量小于1.0 pmol/L。
5、回收率
三組已知的高、中、低濃度樣品，進行五次回收率評估，回收率在85%-115%之間。
6、特異性
本試劑盒識別天然和重組雌酮（E），與結構類似物無交叉。
穩(wěn)定性
2℃-8℃保存，有效期6個月。
【注意事項】
生物安全
1、檢測必須符合實驗室管理規(guī)范的規(guī)定，嚴格防止交叉污染，所有樣品、洗棄液和各種廢棄物都應按照傳染物進行處置。
2、試劑盒的液體組分中，含有proclin-300防腐劑，可能引起皮膚過敏反應，避免吸入煙霧與皮膚接觸。
3、底物液對皮膚、眼睛和上呼吸道有刺激作用，避免吸入煙霧。戴上防護手套，實驗完成后徹底洗手。
4、試劑盒中的終止液為酸性溶液，在使用終止液時，請佩戴防護服，及防護眼睛、手及面部的設施。
5、本試劑盒用于科學研究，不能用于診斷治療。
6、請不要使用其他批號或其他來源的試劑替代本試劑盒中的試劑。
技術要點
1、重溶或者混合蛋白溶液時，避免起泡。
2、加標準品與樣本時，每個標準品濃度和樣本都要更換移液槍頭，公共組分應該懸臂加樣，避免交叉污染。
3、合適的溫育時間，和充分的洗滌步驟，是保證實驗結果準確性的必要條件。
4、底物溶液為無色液體，保存過程中變?yōu)樗{色，代表底物溶液已經(jīng)失效，不得使用。
5、終止液加樣順序與底物溶液加樣順序一致，加入終止液后，藍色底物產(chǎn)物，會瞬間變?yōu)辄S色。
6、實驗中，用剩的板條，應立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。
7、所有液體組分，使用前充分搖勻，嚴格按照說明書標明的時間、加樣量及加樣順序進行溫育操作。
廢物處理
所有使用或未使用的試劑，所有污染性的一次性材料，應當遵循傳染性或潛在傳染性產(chǎn)品的處理程序，每個實驗室都有責任根據(jù)其實驗的類型和危險性級別，進行廢物和污物的處理，同時要嚴格依照有關規(guī)定對待所有的廢物和污物。
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