蛋白質(zhì)純化試劑盒--Pro·SpinTM
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產(chǎn)品型號：CS-800，50 Pack
產(chǎn)品代碼：
產(chǎn)品價格：
折 扣 率： 0
最后更新：2017-06-12
關(guān) 注 度：2695
生產(chǎn)企業(yè)：深圳市國泰宜豐科技有限公司
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產(chǎn)品詳細(xì)介紹
蛋白質(zhì)純化試劑盒--Pro·SpinTM
Pro·SpinTM 離心柱的設(shè)計以去除標(biāo)記抗體中游離的熒光染料、半抗原和載色體等為目的，有利于緩沖交換和脫鹽。（請參照“綜合啟示”一節(jié)中有關(guān)其它類型蛋白純化的補(bǔ)充說明） 純化單元由
（1）一個特殊的含有凝膠過濾介質(zhì)的多空微量離心管，
（2）清洗管，
（3）樣品收集管組成。
使用緩沖液水化離心柱介質(zhì)（參照第二步有關(guān)水化緩沖液注解）。在微量離心機(jī)中離心去除多余的液體。將抗體樣品上樣在離心柱上，再次離心，回收純化的標(biāo)記抗體。
Pro· SpinTM 離心柱具有下列優(yōu)良特性：
1 多樣 去除染料、半抗原或鹽
2 高效 標(biāo)記抗體的回收率大于90%
3 簡單 僅需要一個臺式離心機(jī)
4 快速 僅兩次2分鐘的離心步驟
5 可靠 一致的結(jié)果
6 方便 室溫儲存穩(wěn)定長久的保質(zhì)期
1 mg 標(biāo)記抗體純化方法
1. 每一個離心柱可容納樣品近100uL，如果樣品體積大于100 uL，則將樣品分成份，每份使用不同的離心柱進(jìn)行純化。
2. 輕輕敲擊離心柱以確保干膠沉到離心管底部，打開離心管頂蓋，加入650 uL水化緩沖液。水化緩沖液
注意事項：
用PBS緩沖液水化離心柱。除了PBS之外，其它緩沖液也可使用，但有可能使非特異性抗體通過離子的或 疏水性相互作用與離心柱結(jié)合。這些相互作用會影響標(biāo)記抗體從離心柱中的回收。
3. 蓋上頂蓋，劇烈震蕩5秒鐘，短促敲擊離心管底部去除氣泡。離心柱使用之前，至少水化30分鐘。
離心柱水化注意事項： 使所有干膠都水化是非常重要的。.
4. 水化30分鐘之后，打開離心柱頂蓋，拿掉離心柱底部的塞子。
離心柱儲存注意事項：
水化的離心柱可以在4°C儲存幾天。補(bǔ)充10 mM疊氮化納可以儲存更長時間。使用之前將離心柱恢復(fù)到室溫。
5. 使用可變速離心機(jī)，在750 x g下，將離心柱同清洗管一起離心2分鐘，以便去除多余的液體。
固定角微量離心注意事項：
如果使用固定角微量離心，將定位標(biāo)記模子放入到離心柱中，以便保持追蹤離心柱的位置。準(zhǔn)確離心速度的計算
使用水平式轉(zhuǎn)子或吊桶式轉(zhuǎn)子可以得到最高的產(chǎn)量。然而，固定角轉(zhuǎn)子微量離心也可以得到滿意的結(jié)果，并且省時。 對于可變速微量離心，不要使用按壓式按鈕，因為轉(zhuǎn)速會超過設(shè)定而使轉(zhuǎn)子以最大的離心力運行。如果不能確定在設(shè)置的離心速度上所產(chǎn)生的重力，則使用下面的公式計算出正確的速度：
在這里：
rpm = 每分鐘轉(zhuǎn)
RCF= 相對離心力
r = 半徑，是從轉(zhuǎn)桿中心到轉(zhuǎn)子桶底部的距離
6. 用紙吸掉離心柱末端小滴液體，棄去清洗管和多余液體。不要使凝膠過分干燥。即刻進(jìn)行樣品處理。結(jié)合抗
體的純化
7. 將離心柱拿到明亮處，取出約100 uL樣品（參見步驟1），加到每個離心柱的頂端。
離心柱上樣注意事：
仔細(xì)地將樣品直接地加入到凝膠床頂端的中心位置，不要攪動凝膠的表面。不要用反應(yīng)混合物或樣
品吸管的頭觸及離心柱的側(cè)壁，因為這會降低純化的效率。
8. 將各個離心柱放到收集管中，再將二者放到轉(zhuǎn)子中，保持固定的離心柱方向。
離心柱定位注意事項
離心柱中凝膠介質(zhì)的最高點應(yīng)該總是朝向轉(zhuǎn)子的外側(cè)。
9. 750 x g，離心2分鐘，純化的抗體結(jié)合物將被收集到收集管的底部。
10. 棄去離心柱
11. 在合適的條件下儲存純化的抗體
標(biāo)記抗體的回收
通過表面熒光圖象和考馬斯亮蘭染色的SDS變性凝膠電泳的檢測得知，使用PBS水化緩沖液水化離心柱，可以回收90%多的熒光素標(biāo)記抗體。
材料供給 50個Pro•Spin 離心柱；50 只清洗管；50 只樣品收集管
推薦附加材料
微量離心機(jī)；移液器（槍）；槍頭；微量離心管架；震蕩器
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標(biāo)記蛋白純化綜合啟示
除了抗體之外，使用 Pro•Spin 離心柱也可以從蛋白中去除染料、半抗原、載色體和鹽。然而，由于蛋白與離心柱基質(zhì)特異性或非特異性的相互作用，使蛋白的回收率降低。下表中列出了常見的相互作用模式，并給出了解決的方法。
問題 解決方法
與離心柱基質(zhì)的疏水性相互作用 加入非離子型變性劑，減少離子強(qiáng)度或增加水化緩沖液pH
與離心柱基質(zhì)的離子型相互作用 增加水化緩沖液的離子強(qiáng)度
樣品沉淀 增加離子強(qiáng)度，去除水化緩沖液中的鹽或稀釋樣品
樣品的蛋白酶降解 在水化緩沖液中加入合適的蛋白酶抑制劑
問題 解決方法
與離心柱基質(zhì)的疏水性相互作用 加入非離子型變性劑，減少離子強(qiáng)度或增加水化緩沖液pH
與離心柱基質(zhì)的離子型相互作用 增加水化緩沖液的離子強(qiáng)度
樣品沉淀 增加離子強(qiáng)度，去除水化緩沖液中的鹽或稀釋樣品
樣品的蛋白酶降解 在水化緩沖液中加入合適的蛋白酶抑制劑
Pro·Spin 和 Fluoro·Spin 是Princeton Separations 有限公司的產(chǎn)品商標(biāo)。NIRD (Near Infrared Dye近紅外線染料) 是EMP Biotech GmbH公司的產(chǎn)品商標(biāo)。 NIRDS 由Dyomics 生產(chǎn)。
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