普林斯頓DNA測(cè)序Centri •Sep Columns
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產(chǎn)品型號(hào)：CS-900，32 Pack
產(chǎn)品代碼：
產(chǎn)品價(jià)格：
折 扣 率： 0
最后更新：2017-06-12
關(guān) 注 度：3283
生產(chǎn)企業(yè)：深圳市國(guó)泰宜豐科技有限公司
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產(chǎn)品詳細(xì)介紹 Centri •Sep Columns
使用CENTRI-SEP離心柱可以快速、有效地將大分子（蛋白質(zhì)、核酸、碳水化合物復(fù)合物等）從小分子（核苷酸、緩沖液鹽分等）中純化出來(lái)。柱子基于 Sambrook 等。 描述而設(shè)計(jì)，即用凝膠過濾法將缺刻平移反應(yīng)中的DNA純化。純化裝置是由一個(gè)特殊的多孔微型離心管、干膠、清洗管和樣品收集管組成，所有的設(shè)計(jì)都是以純化為目的。
該凝膠可以極好地回收大于16堿基對(duì)或25-mer的DNA片斷，并去除高于98%的鹽分、核苷酸混合物和其它 低分子量化合物。
使用試劑級(jí)水或合適的緩沖液水化離心柱，在微量離心管或吊桶式離心管中離心，去除液體。然后，將樣品加到凝膠柱上，再次離心，進(jìn)行樣品處理。通過去除低分子量的化合物而使樣品純化，再使用選擇的緩沖液將純化的蛋白交換出來(lái)。
1、當(dāng)用ABI 373A 和 377A進(jìn)行DNA測(cè)序時(shí)的熒光素反應(yīng)混合物的純化。
2、去除下列反應(yīng)DNA/RNA中游離的標(biāo)記dNTP’s：
z 缺刻平移
z 末端標(biāo)記反應(yīng)
z 聚合反應(yīng)
3、在多種限制性消化反應(yīng)中，脫鹽、去除痕量酚或交換緩沖液中的鹽分。
4、蛋白的純化與脫鹽。
對(duì)于一些通用技術(shù)如酚/氯仿抽提和乙醇沉淀等，這些離心柱的使用具有方便、快速、無(wú)毒等優(yōu)良特性。
z 迅速有效的分離
z 不需預(yù)選擇緩沖液
z 室溫條件下，離心柱穩(wěn)定
z 方便 20-100μl樣品的純化
離心注意事項(xiàng)：
z 使用水平式轉(zhuǎn)子或吊桶式轉(zhuǎn)子可以得到最高的產(chǎn)量。然而，固定角轉(zhuǎn)子微量離心也可以得到滿意的結(jié)果，并且省時(shí)。
z 對(duì)于可變速微量離心，不要使用按壓式按鈕，因?yàn)檗D(zhuǎn)速會(huì)超過設(shè)定而使轉(zhuǎn)子以最大的離心力運(yùn)行。
在這里：
rpm = 每分鐘轉(zhuǎn)
RCF= 相對(duì)離心力
r = 半徑，是從轉(zhuǎn)桿中心到轉(zhuǎn)子桶底部的距離
質(zhì)量控制：對(duì)每一批CENTRI-SEP離心柱的分離效率都經(jīng)過檢測(cè)，保證精確性。
材料供給：
z CENTRI-SEP離心柱包括干膠
z 清洗管（2ml）
z 樣品收集管（1.5ml）
推薦附加材料：
z 微量離心機(jī)（Eppendorf 5415C，可
變速或等速）
z 可調(diào)移液器（Pipetman 100 μl）
z 移液Tips(槍頭)
z 球狀移液管（Dispo, 2ml乳膠）
z 微量離心管架
z 振蕩器
常見問題：
1. 離心柱水化之后沒有將間隙液體除凈。
2. 在純化樣品過程中觸摸了離心柱。這兩種操作錯(cuò)誤都會(huì)導(dǎo)致無(wú)效的分離。
解決方法：
1. 如果注意到某一離心柱在第一次離心后所釋放出來(lái)的液體比其他的少，則再短暫離心一次，通�？沙齼舳嘤嗟囊后w。
2. 將樣品直接點(diǎn)在凝膠床的中心，不要讓樣品接觸離心柱的壁。
（1）Reference: Sambrook, J., Fritsch. E.F., and Maniatis, T., Molecular Cloning: A Laboratory Manual. Cold
Spring Harbor Laboratory. 1989.
訂貨信息：
目錄號(hào) 規(guī)格
CS-900 32Pack
CS-901 100Pack
測(cè)序前的染料終止子的去除
由 Applied Biosystems 有限公司推薦的 CENTRI-SEP 離心柱可以將已完成的 DNA 測(cè)序反應(yīng)中過量的DyeDeoxy™ 終止子高效、可靠地去除。下列方法可與 Taq DyeDeoxy™ 和 ABI Prism™終止循環(huán)測(cè)序試劑盒聯(lián)合使用，還可與 AmpliTaq®, FS等聯(lián)合使用，用 ABI 373A or 377A 測(cè)序儀讀取。
1. 水化離心柱
1.1 輕輕敲打柱子以保證干膠沉淀到離心柱底部。
1.2 打開離心柱頂端的蓋子，加入0.80 ml試劑級(jí)水或緩沖液使干膠吸脹。調(diào)整離心柱底部的塞子使其處于合適的位置以便離心柱可以自己站立。再蓋上蓋子，搖動(dòng)、倒轉(zhuǎn)、或短時(shí)震蕩使干膠水化。干膠完全水化是非常重要的。
1.3 在使用之前，離心柱需要在室溫條件下水化至少30 分鐘。水化后的離心柱于 4°C可以冷藏幾天。補(bǔ)充10 mM 疊氮化鈉可以儲(chǔ)存更長(zhǎng)時(shí)間。在繼續(xù)使用之前，需將離心柱恢復(fù)到室溫。
2. 去除縫隙液體
2.1 倒轉(zhuǎn)或短促敲打離心柱，使凝膠乳漿化，并盡量
使其保持水平狀，清除離心柱凝膠中的氣泡，然后將離心柱放在微量試管架上使膠沉淀。
2.2 當(dāng)凝膠已經(jīng)沉淀無(wú)氣泡后，打開離心柱的頂蓋，去掉底部的塞子。
2.3 將離心柱中過量的液體在清洗管（2ml）中控干。如果液體沒有通過離心柱的末端立刻流出來(lái)，則使用一只2ml的乳膠頭吸管，在柱子的頂端給予一定的空氣壓力，迫使液體開始流過離心柱過濾器。在液體流完之后，離心柱將自動(dòng)停止。大約200-250μl的液體從離心柱中流出，棄掉液體。
2.4 在可變速離心機(jī)上以750g 將離心柱和清洗管一起離心2分鐘，以便去除縫隙中的液體。例如：使用Eppendorf 5415C型微量離心管，在750g（7.3cm轉(zhuǎn)子）的離心速度為3,000rpm。如果使用固定角微量離心機(jī)， 一定要在離心柱中使用定位標(biāo)記模，以便追蹤離心柱的位置。
2.5 除去大約300μl液體，如果離心柱末端還有一小滴液體，用紙吸掉。棄去清洗管和間隙液體。不要使凝膠過分干燥。即刻進(jìn)行樣品處理。
3. 樣品處理
3.1 將離心柱置于明亮處，在凝膠頂端加入20μl 已完成DyeDeoxy™終止子反應(yīng)的混合物，仔細(xì)地將樣品直接地加入到凝膠床頂端的中心位置，不要攪動(dòng)凝膠的表面（見圖1）。不要用反應(yīng)混合物或樣品吸管的頭觸及離心柱的側(cè)壁，因?yàn)檫@會(huì)降低純化的效率，以及由于過量的染料使實(shí)驗(yàn)失敗。
3.2 將離心柱放入樣品收集管（1.5ml）后，置于轉(zhuǎn)子中，保持固有的離心柱方向。柱子中凝膠介質(zhì)的最高點(diǎn)應(yīng)該總是朝向轉(zhuǎn)子的外側(cè)（見圖1）。在750 ⋅ g離心柱子和收集管 2 分鐘。純化的樣品將被收集在樣品收集管的底部。棄去離心柱，使用ABI樣品制備方法繼續(xù)處理樣品。
3.3 真空離心干燥樣品，不要使用加熱法。
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