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產(chǎn)品型號：PP-121
產(chǎn)品代碼：
產(chǎn)品價(jià)格：
折 扣 率： 0
最后更新：2017-06-26
關(guān) 注 度：3131
生產(chǎn)企業(yè)：深圳市國泰宜豐科技有限公司
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產(chǎn)品詳細(xì)介紹PSIΨ CLONE BIG BAC DNA 分離試劑盒
該試劑盒可梯度用于25-250mL的培養(yǎng)物(OD600Η4-6)，10倍梯度(1mL試劑/每10mL培養(yǎng)物)用于重懸、中和、裂解和獲取基質(zhì)反應(yīng)物。獲取的基質(zhì)反應(yīng)物被直接加到裂解物中，去除染色體DNA。再將此混合物倒入多用柱子，進(jìn)行清洗和洗脫。每個(gè)柱子的清洗和洗脫緩沖液也是梯度的。試劑可供250mL培養(yǎng)物的分離，其中包括5個(gè)空柱子。
試劑盒組分
重懸緩沖液（1） 25 ml
裂解液（2） 25 ml
中和緩沖液（3） 25 ml
BAC DNA結(jié)合樹脂緩沖液（4） 2瓶 25 ml
清洗緩沖液（5） 80 ml
洗脫緩沖液（6） 10 ml
RNA 酶A 5.0mg (2 x 2.5mg0 Vial
洗脫柱 5
除了再懸浮緩沖和所有組件核糖核酸酶可能是儲存在室溫下。在添加核糖核酸酶再懸浮緩沖、存儲4 ℃條件。
PSI Clone Big BAC DNA試劑盒操作方法（適用于25-250mL培養(yǎng)物）產(chǎn)品號PP-121
本操作方法是為了從30mL LB(含有12.5 ug/mL氯霉素)培養(yǎng)物中分離模板級BACDNA而設(shè)計(jì)，培養(yǎng)物的OD600在4.0-6.0之間。通常產(chǎn)量為5-7 ug DNA。
使用10倍梯度調(diào)整可變的培養(yǎng)物體積。例如：過夜培養(yǎng)物如果為30mL OD600 4.0，離心之后，要重懸在3mL的重懸緩沖液(含100ug/mL RNAse A)中，然后是3mL的裂解緩沖液，3mL中和緩沖液。
1. 將1mL重懸緩沖液加入到RNAse A管中溶解RNAse A，然后再將其加回到重懸緩沖液中，混勻。
2. 在細(xì)胞沉淀中加入3mL重懸緩沖液，輕輕地吹打，使其懸浮。
加3mL裂解緩沖液，輕輕上下倒轉(zhuǎn)混勻。室溫裂解5分鐘。
4. 加3mL中和緩沖液，輕輕上下倒轉(zhuǎn)混勻，直到濃重的白色沉淀形成，冰上孵育20分鐘。
5. 25,000 x g離心30分鐘( 使用SS-34轉(zhuǎn)子或等同轉(zhuǎn)子)澄清裂解物。將裂解物移到一干凈試管中，如裂解物不澄清，混勻，再離心。
6. 在澄清的裂解物中加3mL BAC結(jié)合樹脂，倒轉(zhuǎn)幾次，室溫孵育10分鐘，(每2分鐘倒轉(zhuǎn)一次)。將該溶液倒入柱子的桶中，控干。
7. 加3 x 5mL清洗緩沖液，控干，將柱子放到一個(gè)空50mL錐型管(Falcon管或相關(guān)試管)中，去除過量的清洗緩沖液，在平板式離心機(jī)上750 x g離心2分鐘，棄掉清洗液。
8. 將1mL洗脫緩沖液加入到柱子中，孵育2分鐘，按上述方法離心(使用一個(gè)新管)，然后再重復(fù)洗脫一次。
9. 如前所述，加1倍體積的異丙醇，混勻、沉淀DNA、20,000 x g離心30分鐘。去除上清，加入2mL70%乙醇，混勻洗滌DNA。離心去除過量的70%乙醇，風(fēng)干約5分鐘。
10. 將沉淀重懸于適當(dāng)?shù)腡E或選擇的低鹽緩沖液中。
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| 會員級別：免費(fèi)會員 |
| 加入時(shí)間：2017-01-11
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