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      蛋白質(zhì)純化試劑盒--Pro·SpinTM
      產(chǎn)品型號(hào):CS-800,50 Pack
      產(chǎn)品代碼:
      產(chǎn)品價(jià)格:
      折 扣 率: 0
      最后更新:2017-06-12
      關(guān) 注 度:2701
      生產(chǎn)企業(yè):深圳市國(guó)泰宜豐科技有限公司
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      產(chǎn)品詳細(xì)介紹 
      蛋白質(zhì)純化試劑盒--Pro·SpinTM


      Pro·SpinTM 離心柱的設(shè)計(jì)以去除標(biāo)記抗體中游離的熒光染料、半抗原和載色體等為目的,有利于緩沖交換和脫鹽。(請(qǐng)參照“綜合啟示”一節(jié)中有關(guān)其它類型蛋白純化的補(bǔ)充說(shuō)明) 純化單元由

      (1)一個(gè)特殊的含有凝膠過(guò)濾介質(zhì)的多空微量離心管,
      (2)清洗管,
      (3)樣品收集管組成。
         使用緩沖液水化離心柱介質(zhì)(參照第二步有關(guān)水化緩沖液注解)。在微量離心機(jī)中離心去除多余的液體。將抗體樣品上樣在離心柱上,再次離心,回收純化的標(biāo)記抗體。
         Pro· SpinTM 離心柱具有下列優(yōu)良特性:
       
           1 多樣 去除染料、半抗原或鹽
           2 高效 標(biāo)記抗體的回收率大于90%
           3 簡(jiǎn)單 僅需要一個(gè)臺(tái)式離心機(jī)
           4 快速 僅兩次2分鐘的離心步驟
           5 可靠 一致的結(jié)果
           6 方便 室溫儲(chǔ)存穩(wěn)定長(zhǎng)久的保質(zhì)期
       
         1 mg 標(biāo)記抗體純化方法
          1. 每一個(gè)離心柱可容納樣品近100uL,如果樣品體積大于100 uL,則將樣品分成份,每份使用不同的離心柱進(jìn)行純化。
          2. 輕輕敲擊離心柱以確保干膠沉到離心管底部,打開(kāi)離心管頂蓋,加入650 uL水化緩沖液。水化緩沖液
             注意事項(xiàng):
             用PBS緩沖液水化離心柱。除了PBS之外,其它緩沖液也可使用,但有可能使非特異性抗體通過(guò)離子的或 疏水性相互作用與離心柱結(jié)合。這些相互作用會(huì)影響標(biāo)記抗體從離心柱中的回收。
          3. 蓋上頂蓋,劇烈震蕩5秒鐘,短促敲擊離心管底部去除氣泡。離心柱使用之前,至少水化30分鐘。
           離心柱水化注意事項(xiàng): 使所有干膠都水化是非常重要的。.
          4. 水化30分鐘之后,打開(kāi)離心柱頂蓋,拿掉離心柱底部的塞子。
             離心柱儲(chǔ)存注意事項(xiàng):
             水化的離心柱可以在4°C儲(chǔ)存幾天。補(bǔ)充10 mM疊氮化納可以儲(chǔ)存更長(zhǎng)時(shí)間。使用之前將離心柱恢復(fù)到室溫。
          5. 使用可變速離心機(jī),在750 x g下,將離心柱同清洗管一起離心2分鐘,以便去除多余的液體。
             固定角微量離心注意事項(xiàng):
             如果使用固定角微量離心,將定位標(biāo)記模子放入到離心柱中,以便保持追蹤離心柱的位置。準(zhǔn)確離心速度的計(jì)算
      使用水平式轉(zhuǎn)子或吊桶式轉(zhuǎn)子可以得到最高的產(chǎn)量。然而,固定角轉(zhuǎn)子微量離心也可以得到滿意的結(jié)果,并且省時(shí)。 對(duì)于可變速微量離心,不要使用按壓式按鈕,因?yàn)檗D(zhuǎn)速會(huì)超過(guò)設(shè)定而使轉(zhuǎn)子以最大的離心力運(yùn)行。如果不能確定在設(shè)置的離心速度上所產(chǎn)生的重力,則使用下面的公式計(jì)算出正確的速度:

      在這里:
      rpm = 每分鐘轉(zhuǎn)
      RCF= 相對(duì)離心力
      r = 半徑,是從轉(zhuǎn)桿中心到轉(zhuǎn)子桶底部的距離

          6. 用紙吸掉離心柱末端小滴液體,棄去清洗管和多余液體。不要使凝膠過(guò)分干燥。即刻進(jìn)行樣品處理。結(jié)合抗
             體的純化
          7. 將離心柱拿到明亮處,取出約100 uL樣品(參見(jiàn)步驟1),加到每個(gè)離心柱的頂端。
             離心柱上樣注意事:
             仔細(xì)地將樣品直接地加入到凝膠床頂端的中心位置,不要攪動(dòng)凝膠的表面。不要用反應(yīng)混合物或樣
             品吸管的頭觸及離心柱的側(cè)壁,因?yàn)檫@會(huì)降低純化的效率。
          8. 將各個(gè)離心柱放到收集管中,再將二者放到轉(zhuǎn)子中,保持固定的離心柱方向。
             離心柱定位注意事項(xiàng)
             離心柱中凝膠介質(zhì)的最高點(diǎn)應(yīng)該總是朝向轉(zhuǎn)子的外側(cè)。
          9. 750 x g,離心2分鐘,純化的抗體結(jié)合物將被收集到收集管的底部。
          10. 棄去離心柱
          11. 在合適的條件下儲(chǔ)存純化的抗體
        
         標(biāo)記抗體的回收
           通過(guò)表面熒光圖象和考馬斯亮蘭染色的SDS變性凝膠電泳的檢測(cè)得知,使用PBS水化緩沖液水化離心柱,可以回收90%多的熒光素標(biāo)記抗體。
        
      材料供給 50個(gè)Pro•Spin 離心柱;50 只清洗管;50 只樣品收集管
        
      推薦附加材料
      微量離心機(jī);移液器(槍);槍頭;微量離心管架;震蕩器
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       標(biāo)記蛋白純化綜合啟示
      除了抗體之外,使用 Pro•Spin 離心柱也可以從蛋白中去除染料、半抗原、載色體和鹽。然而,由于蛋白與離心柱基質(zhì)特異性或非特異性的相互作用,使蛋白的回收率降低。下表中列出了常見(jiàn)的相互作用模式,并給出了解決的方法。
       
       
      問(wèn)題                                                      解決方法
       與離心柱基質(zhì)的疏水性相互作用  加入非離子型變性劑,減少離子強(qiáng)度或增加水化緩沖液pH
       與離心柱基質(zhì)的離子型相互作用  增加水化緩沖液的離子強(qiáng)度
       樣品沉淀                                          增加離子強(qiáng)度,去除水化緩沖液中的鹽或稀釋樣品
       樣品的蛋白酶降解                          在水化緩沖液中加入合適的蛋白酶抑制劑
       

       
      問(wèn)題                                                 解決方法  
      與離心柱基質(zhì)的疏水性相互作用  加入非離子型變性劑,減少離子強(qiáng)度或增加水化緩沖液pH
      與離心柱基質(zhì)的離子型相互作用  增加水化緩沖液的離子強(qiáng)度
      樣品沉淀                                          增加離子強(qiáng)度,去除水化緩沖液中的鹽或稀釋樣品
      樣品的蛋白酶降解                          在水化緩沖液中加入合適的蛋白酶抑制劑

      Pro·Spin 和 Fluoro·Spin 是Princeton Separations 有限公司的產(chǎn)品商標(biāo)。NIRD (Near Infrared Dye近紅外線染料) 是EMP Biotech GmbH公司的產(chǎn)品商標(biāo)。 NIRDS 由Dyomics 生產(chǎn)。
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